Md fogyás rockford il
A rekombináns leptin azonban nagymértékben hatástalan az elhízott egyének túlnyomó többségében a leptin rezisztencia miatt. Itt arra törekszünk, hogy új betekintést nyerjünk a leptin BBB transzport mechanizmusaiba és annak szerepébe a leptin rezisztenciában. Mód Egy új eszközt fejlesztettünk ki a leptin transzport infravörös fluoreszcensen jelölt leptinnel történő kombinálására, szöveti tisztítással és fény-fluoreszcens mikroszkóppal kombinálva.
Ezeket az adatokat nyugati blot segítségével megerősítettük. Eredmények 3D teljes agyi képalkotás alkalmazásával hasonló leptin felhalmozódást mutatunk ki a sovány és elhízott egerek körülményei között, főként a choroid plexusban CP.
Következtetések Összességében megállapítottuk, hogy a CP kulcsfontosságú szerepet játszik a leptin cerebrospinális folyadékba történő szállításának ellenőrzésében, és onnan a leptin receptoron keresztül közvetített célterületekre, például az MBH-ra.
Hasonló leptinszintek a körülbelüli szervekben és a sovány és az elhízott egerek MBH-jában az intenzív leptin BBB transzportot javasolják a leptin rezisztens egerekben. Bevezetés Az energiaháztartás hogyan lehet elégetni a zsírt thc az elhízás és a metabolikus szindróma megelőzésének kulcsa.
Az agy fontos szerepet játszik ebben a homeosztázisban a perifériás szövetek bemeneteinek befogadásával és a különböző érzések, például jutalom és telítettség szabályozásával. Emellett a közvetlen beidegzés, valamint a hormonokon keresztüli közvetett jelzés lehetővé teszi a visszacsatoló rendszer visszacsatolását a perifériás szervekbe [1].
Ezeknek a perifériás jeleknek az agyba és a célterületekbe történő szállítását szabályozott módon szabályozza a vér-agy gát, lényegében egy endoteliális sejtréteg, amely osztja a mikrovaszkulátust az agykamrából. Az egyik olyan aktív peptidhormon, amely aktív BBB-transzportot igényel, a leptin, egy 16 kDa-os hormon, amelyet fehér zsírszövetben szintetizálnak és a testzsír mennyiségével arányosan forgalomba hozzák [4, 5].
z-line.hu — срок регистрации домена истёк
A leptin adiposztátként szolgál, azaz képes a test többi részét tájékoztatni a rendelkezésre álló zsírraktárakról. A leptin fontosságát a szisztémás energia homeosztázis szabályozásában a leptin genetikai veszteségeiben szenvedő emberek klinikai megfigyelései mutatják, amelyek a korai gyermekkorban hiperfágia és morbid elhízás alakulnak ki, amelyet leptin-helyettesítő terápia megfordíthat [6].
A legtöbb elhízott alany azonban nem hiányos a leptinben, hanem leptin rezisztens.
Вырвав одно из красных растений, Ричард немедленно бросил его, когда оказавшаяся на поверхности зеленая кожистая сфера шевельнулась на красном стебле. Упав, растение змеей проползло несколько сантиметров к своей ямке и укрыло собой зеленую сферу.
A magas cirkulációs leptinszint ellenére a leptin-rezisztens egyének jellemzően meghajtanak extra kalóriát enni, ami akadályozza a fenntartható fogyást [7]. A leptin rezisztencia molekuláris okai még nem teljesen egyértelműek, de a SOCS3 expressziójához [8], a cirkuláló c-reaktív fehérje [9] megemelkedett szintjéhez vagy a hipotalamuszban a hiszton deacetiláz 5 aktivitásának csökkenéséhez vezethetnek [10]. Ezen túlmenően a leptin az agyba történő károsodása fontos szerepet játszik a leptin rezisztenciában [11].
Ezt főként a leptin-transzport tanulmányok támasztják alá, amelyek radioaktívan jelölt leptint alkalmaztak, és a vér-CSF leptin arányának csökkenését mutatják, ami a tompított leptin transzport kinetikára utal, és így a leptin rezisztencia oka [12].
március Giveaways: Nyertesek listája! - Lóversenyfogadás -
Hasonlóképpen, El-Haschimi és munkatársai egy sor intracerebrális kamrai ICV leptin injekciós kísérletet végeztek, ami szintén a leptin BBB transzport csökkenését jelezte [13].
A leptinnek át kell haladnia a BBB-n, hogy elérje a neuronális célpontokat a mediobasal hipotalamuszban MBH és más agyterületeken. A leptin átvitele a BBB-n és annak válaszadó neuronjain keresztül, amelyet a leptin-receptor LepR expressziója határoz meg, még mindig vita multi slim cigaretta képezi [14].
A múlt munkája azt tanácsolja, hogy a BBB transzportot a tanycyták, azaz a medián eminencia ME speciális ependimális sejtjei segítik, az MBH alján lévő keringési szerv, amely az agyi eredetű jeleket a hypophysis és a perifériás szervek szekréciójához vezeti a keringésben [ 15, 16]. Ezt követően a leptint tanycytákon keresztül szállítják a kamrai tér cerebrospinális folyadékába CSFahonnan ezután oldalirányban diffundál az MBH-ba [17]. Az újabb munka arra utal, hogy a BBB endoteliális sejtjeinek közvetlen közvetlen részvétele a leptin-transzport fő mechanizmusa [18].
A LepR specifikusan a BBB endoteliális sejtjeiben való leállása funkcionálisan összefügg a leptin CSF és LepR pozitív agyrégiókba történő csökkenésével, és az elhízás súlyosbodásával, amikor az egereket nagy zsírtartalmú étrendnek tették ki [18]. A sűrű LepR expressziót különösen a choroid plexusban CP [19] találjuk, amely a BBB fogyás napló lapok része az oldalsó, a központi és a negyedik kamrai falakhoz rögzítve.
A CSF-be belépő molekulák szabadon diffundálhatnak a kamrákba soroló számos agyterületre [20]. Ennek megfelelően a CP erősen kötődött az agy leptin transzportjához [21]. Itt arra törekedtünk, hogy új megértést szerezzünk a leptin BBB transzportjában az agyba történő leptin transzport vizualizálásával és összehasonlításával a teljes egér agyi 3D képalkotással a fénylap fluoreszcencia mikroszkóppal.
Továbbá arra törekedtünk, hogy foglalkozzunk azzal a kérdéssel, hogy a CP, ME és MBH leptin transzportja megváltozott-e az étrend-indukált elhízásban DIO és így a leptin rezisztens egerekben, a chow-táplált és leptin-érzékeny sovány kontroll egerekhez képest. Ezenkívül összehasonlítottuk a leptin szintjét a DIO egerek ME és MBH-ban a mérsékelt étrendeléssel, mély kalóriatartalommal vagy az exendingyel végzett ismételt kezeléssel annak tisztázása érdekében, hogy az MBH-ba történő megváltozott leptin-transzport magyarázhatja-e a leptin kiváló helyreállítását.
A diétás beavatkozás vizsgálatához a DIO egereket 4 kísérleti csoportra osztottuk. A DIO egerek fennmaradó 3 csoportját a vizsgálat 0. Az életkorhoz illeszkedő egereket tápláltuk a kontroll csoportként. Az étrend-intervenciós vizsgálat végén minden egeret először egy vivőanyag vagy leptin intraperitoneális ip injekciójának vetettünk alá 45 md fogyás rockford il, mielőtt a szerv kivonására a nyaki diszlokációval feláldoznánk. Az egereket kezelőcsoportokba osztottuk ki a kezdő testtömegük alapján.
Az in vivo kísérleteket a vizsgálók vakjai nélkül végezzük. Valamennyi vizsgálat a megfelelő mintaméretek biztosítására szolgáló teljesítményelemzéseken alapult, és a bajor állam, Németország által jóváhagyott.
A kapcsoláshoz nem használt festékoldatot ugyanabba az abszorpciós értékre hígítottuk, mint a kapcsolt leptinmintát, és kontrollként használtuk. A fagyasztási-felolvasztási ciklusok elkerülése érdekében a kapcsolt leptint sötét md fogyás rockford il tároltuk, és 4 ° C-on tartottuk rövid távú tárolásra és ° Md fogyás rockford il tartós tárolásra.
Домен не продлён
A leptin-CW minta puffercserét hajtott végre. Miután a mintát az oszlopra töltjük, az oszlopot 10 oszlop térfogatú A pufferrel mossuk. Median eminence és mediobasal hypothalamus disszekció A disszekciós mikroszkóp alatt a ME a vékony szerkezetűnek tekinthető a szagittális sík után, amely a hipotalamusz tetején fekszik.
Láthattuk, hogy a fenestált vérerek az ME mentén futnak.
Az ME eltávolítása szünetet okoz a harmadik kamrai falban, és kis mennyiségű folyadékot látott a kamrából. Ez megerősítheti, hogy az ME-t eltávolították.
Az MBH eltávolításához az agyat szikével elvágták, közvetlenül a hypothalamus közepén keresztül.
- Fogyás 65 font
Ezután a két agy felét lefektetik, hogy a hipotalamusz felfelé nézzen. Ha túl sok szövetet távolítottak el, akkor egy md fogyás rockford il felülete lesz. Finom csipesszel két 45 ° -os vágást végeztünk függőlegesen az MBH mindkét oldalán.
A szöveteket folyékony nitrogénben lefagyasztottuk, és ° C-on tároltuk. Protein extrakció és western blotolás Mivel a ME és az MBH minták csak nagyon kis mennyiségű szövetet tartalmaznak, a 2 egérből vett mintákat összegyűjtöttük, hogy elegendő fehérje szintet biztosítsanak a kimutatáshoz.
A mintákat szonikálással lizáltuk, majd 30 percen át forgattuk a kerékre, hogy biztosítsuk a szövetek teljes szuszpenzióját lízis pufferben. A mintákat ezután 12 x g-vel 7 percig centrifugáltuk, és a felülúszókat összegyűjtöttük. A denzitometriás analízist ImageJ 1.
Davenport, Lancaster, SC E. Ehlen, St. Charles, MO E. Jordánia, Sylva, NC F.
Rekombináns egér leptint adtunk a sejtekhez 10 nM végkoncentrációban. A sejteket 30 percig stimuláltuk hordozóval, leptinnel, CW festékkel vagy leptin-CWmal, kétszer mostuk jéghideg PBS-sel, majd ° C-on lefagyasztottuk. A gén expresszióját Δ-Δ Ct módszerrel értékeltük. A szövetek tisztítása és a fluoreszcens mikroszkópia A kivágott agyat PaxGene-ben PreAnalytiX, Hombrechtikon, Svájc rögzítettük a gyártó ajánlásainak megfelelően, majd ezt követően kémiai eljárást végeztünk optikai tisztítással, amint azt korábban leírtuk [23].
A lektin megjelenítéséhez Thermo Fisher Scientific Inc. A 3D rekonstrukció és renderelés Imaris vers. Az agyakat ° C-on fagyasztottuk, OCT-re szereltük és koronálisan vágtuk egy kriosztáton 30 µm-es szakaszokra. A TBS-sel végzett 3x5 perces mosási lépések után a másodlagos szamár anti-nyúl antitestet 1: blokkoló pufferben, Thermofischer Scientific, Cat A inkubáltuk agyszeletekkel 1 órán át szobahőmérsékleten.
Mosás után a szelvényeket DAPI-vel 1: ellensúlyoztuk és csúszdákra szereltük.
2013. március Giveaways: Nyertesek listája! - Lóversenyfogadás - 2021
A stack és overlay képeket ImageJ képelemző szoftverrel készítettük 1. A fenotípusok közötti különbségek összehasonlítására kétfős Student t-próbát vagy egyirányú ANOVA-t használtunk Bonferroni utóvizsgálataival. A 0, nél kisebb P-értékeket szignifikánsnak tekintettük.
- За обедом принялись спорить насчет ружья.
- Что ж, хорошо.
- Ну а потом принимайте решение самостоятельно.
- А потом она услышала Патрика: - Где же дядя Ричард.
- А вчера вечером, когда ты уснула, я так и сказал мамзельке: дескать, не сомневаюсь в том, что ты будешь общаться со всеми.
A Gauss-eloszlást a D'Agostino-Pearson omnibus teszttel elemeztük. A leptin-CW terméket ezután anioncserélő kromatográfiás eljárásnak vetettük alá 1b. Ábraés az eredményül kapott Frakciókat, az 5-ös kimosódási frakciót, valamint a naivitatlan leptint és a leptin-CW jelzett terméket SDS-oldallal és nyugati Blotting 1c. A leptin elleni antitesttel végzett immunjelölés és az infravörös CW fluoreszcencia egyidejű közvetlen kimutatása a jelöletlen leptin leptin-CWra való teljes átalakulását, azaz a jelölt leptin hiányát mutatja a reakciótermékben 1c — i.
Ezen túlmenően a Frakciók leptin-CW sávokat tartalmaztak, amelyek nagyobbnak tűntek kb. Nevezetesen, a leptin elleni antitest mélyen csökkent affinitást mutatott a leptin-CWval szemben 1c — i.
Ábraés a leptin-CW csak akkor volt látható, amikor a jelintenzitás erősen erősödött kiegészítő ábra 1A. A címkézett leptin a szövetek tisztításával és a fény-fluoreszcens mikroszkóppal kombinálva lehetővé teszi a leptin eloszlásának 3D-s megjelenítését az intakt egér agyban. A címkézett leptint ezután 20 héten át HFD-vel táplált, chow-táplált sovány egerekbe vagy életkorhoz igazított étrend-indukált elhízott egerekbe injektáltuk.
Az agyakat a leptin injekciók után 45 perccel összegyűjtöttük, és szöveti tisztításnak vetettük alá, majd Md fogyás rockford il követve 3D-s teljes agyi képeket kaptunk. Az F1 — F4 frakciókat UV-abszorpció nm alapján gyűjtöttük össze.
A leptin sávokat leptin antitesttel piros vagy infravörös fluoreszcenciával zöld detektáltuk. A bioaktivitást in vivo tovább megerősítettük leptin ip, 5 mg kg- 1 injektálásával egerekben, és a pSTAT3-t 45 perccel a leptin beadása után analizáltuk pSTAT3 piros, leptin vagy a festék csak zöld színben látható.
Az e és f méretaránya és µm. A D adatai 3 ± független kísérletre vonatkoznak ± SEM. PBS vagy CWfesték önmagában.
